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熒光顯微鏡激發熒光的方式有哪些

點擊次數:3172  發布時間:2021-06-28
  熒光顯微鏡是醫院科研、病理、檢驗等部門常用的醫用光學儀器之一。因為普通的顯微鏡是在明亮的背景上觀察暗物,而熒光顯微鏡是在暗背景下觀察彩色的圖像,因此它比普通的顯微鏡分辨力提高100倍,可以觀察到普通顯微鏡看不到的細節。但是它的調整,校正難度較高,只要解決了熒光顯微鏡的問題,其它顯微鏡問題就迎刃而解。
  光源是熒光顯微鏡主要組成部分,熒光顯微鏡都采用200W的超高壓汞燈作光源。它是由石英玻璃制作,中間呈球形,內充有一定量的汞,工作時在兩極間放電,引起水銀蒸發,球內氣壓迅速升高,當水銀*蒸發時,可達50~70個標準大氣壓力,這一過程一般約5~15min。超高壓汞燈的發光是電極間放電使水銀分子在不斷解離和還原過程中發射光量子的結果。它發射很強的紫光,足以激發各類熒光物質,因此被熒光顯微鏡普遍采用。
  熒光顯微鏡是免疫熒光組織化學的基本工具。它是由超高壓光源、濾片系統(包括激發和壓制濾板)、光學系統和攝影系統等主要部件組成,是利用一定波長的光激發標本發射熒光。
  熒光顯微鏡激發熒光的方式:按光的波長范圍分為UV激發法(使用紫外線照明法)和BV激發法(使用藍紫光)兩種。
  UV激發法是用短于400nm外光進行激發。該法不存在可見的激發光,所以被觀察的熒光呈現該染料固有的熒光,容易判別標本上的特異熒光和背景組織的自身熒光。
  BV激發法是以404nm、434nm為中心的由紫外至藍光進行激發。該方法使用藍光照射標本,所以熒光顯微鏡的截止濾光片必須使用可*阻斷藍光并可充分通過所需綠、黃熒光的濾光片。用于熒光抗體法的熒光色素。對于激發光的極大吸收波長和熒光的極大發光波長比較接近,所以BV激發法使用的濾光片必須使用銳截止式濾光片。該法可用藍光作為激發光,所以熒光色素的吸收效率較高,可得到較明亮的圖像。其缺點是500nm以下的熒光無法看到,而500nm以上的使整個圖像顯黃色。在熒光抗體法中,大多以熒光色素特有的顏色來判斷其特異性,所以在討論微妙的特異性時,上述BV激發法的缺點往往影響極大?!?/div>
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